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氨基端而不影响功能,这种载体适用于编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞,虽然宿主和质粒编码的片段各自都没有酶活性,但它们可融为一体,形成具有酶活性的蛋白,从而实现互补 α-互补(Alpha complementation) : 噬菌体
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重组质粒克隆的方法常用的有a- 互补、小规模制备质粒DNA进行酶切分析、插入失活、PCR以及杂交筛选的方法。最常用的方法是小规模制备质粒DNA进行酶切分析,对于带有LacZ基因的载体还可以结合a-互补现象来筛选。a-互补现象:因为许多载体都
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自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆
策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。外源DNA 片段和质粒载体的连接反应策略有以下几种:1、带有非
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表达,才能实现遗 传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。转化过程所用的受体细胞一般是限制-修饰 系统缺陷的变异株,即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株。 α-互补现象:因为许多载体都带有一个 LacZ 基因的调控序列和头 146 个
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一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆 策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。外源DNA 片段和质粒载体的连接反应策略有以下几种:1、带有非互补突出端的片段 用
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载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆
策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。外源DNA 片段和质粒载体的连接反应策略有以下几种:1、带有
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细胞出现新的遗传性状。转化过程所用的受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的变异株,即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株。α-互补现象:因为许多载体都带有一个LacZ基因的调控序列和头146个氨基酸的编码信息,编码α-互补肽,该肽段能与宿主编码的缺陷
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密码子配对辨认时,大多数情况遵守碱基互补配对原则,但也可出现不严格配对,尤其是密码子的第三位碱基与反密码子的第一位碱基配对时常出现不严格碱基互补,这种现象称为摆动配对。 通用性 蛋白质生物合成的整套密码,从原核生物到人类都通用。但已发现少数例外 [2] ,如动物细胞的线粒体、植物细胞的叶绿体。
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程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α
互补现象等来鉴别重组子和非重组子。外源DNA片段和质粒载体的连接反应策略有以下几种:1、带有非互补突出端的片段 用
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浓度比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。外源DNA
片段和质粒载体的连接反应策略有以下